真核mRNA測序5-6G

服務(wù)介紹：

轉(zhuǎn)錄組測序（mRNA-seq）：基于Illumina測序平臺，對某一物種或特定細(xì)胞在某一功能狀態(tài)下產(chǎn)生的mRNA進行高通量測序，既可以提供定量分析，檢測基因表達水平差異，又可以提供結(jié)構(gòu)分析，發(fā)現(xiàn)稀有轉(zhuǎn)錄本，并且對差異表達基因進行功能注釋。

實驗流程：

樣本處理-TotalRNA抽提與質(zhì)檢-文庫構(gòu)建-PE150測序-數(shù)據(jù)分析；

送樣運輸要求：

1）樣品類型：細(xì)胞、動物新鮮組織、植物組織、全血、血清、血漿、石蠟切片、或RNA樣品。

2）樣品的量：新鮮動物組織 ≥100mg（含肌纖維或脂肪等組織的樣品 RNA 含量較低，送樣量需增加）。新鮮培養(yǎng)細(xì)胞 ≥5×10⁶ 個（請清洗后離心得細(xì)胞沉淀，用 TRIzol 充分裂解并干冰運輸）。新鮮全血 ≥1mL（新鮮血液樣本，不可使用凍存血。建議向新鮮血液中加入 3 倍體積的 TRIzol LS 裂解液，干冰運輸）。血清，血漿（一般是用至少2ml的全血分離出來的量）。PBMC>1*10⁷(加Trzol混勻，避免反復(fù)凍融)。植物組織 ≥1g（含多糖多酚等的復(fù)雜植物組織，請盡可能多的送樣）。石蠟切片5-10 張/卷（未經(jīng) HE 染色的切片；厚度≥5µm；組織區(qū)域面積≥10mm×10mm；有核細(xì)胞比例＞80%；腫瘤細(xì)胞比例＞20%。建議使用 1 年內(nèi)的 FFPE 樣本）。

3）樣品質(zhì)量：RNA無明顯降解，提取的總RNA OD260/280值在1.8~2.2之間，濃度 ≥ 500 ng/μl，28S:18S ≥ 1.5，RIN ≥ 7。

4）樣品保存：細(xì)胞樣品或新鮮組織塊（切成~50mg的小塊）可用TRIZOL或RNA保護劑處理或液氮凍存后，-80℃保存。RNA樣品可溶于乙醇或RNA-free的超純水中，-80℃保存。樣品保存期間避免反復(fù)凍融。

5）樣品運輸：樣品置于1.5 ml管中，封口膜封好，干冰運輸。