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人過敏毒素/補體片斷4（C4a）ELISA試劑盒操作流程： 1. 根據需要，將若干孔德條帶放置在支架上； 

2. 將標本、陰性質控、陽性質控以及標準品作 1：200 稀釋（將５μｌ樣品加稀 釋液稀釋到 1ml，混勻） ；

3. 取 100μl 已稀釋的血清樣品、標準品和陰性質控、陽性質控加入相應得孔板 內（質控和標準品至少需做兩孔） ，A1 孔不加液體作為空白底色；

4. 在 37℃溫箱中放置 30 分鐘；

5. 到時間后將孔被液體甩去，并用 1X 洗滌液反復清洗 4 次，zui后用蒸餾水洗 一次；

6. 在每孔內加 100μl 酶結合物（需按比例稀釋，除 A1 孔外） ，輕微混勻；

7. 在 37℃溫箱中放置 30 分鐘；

8. 甩去孔內酶結合物，用 1X 洗滌液反復清洗 4 次，zui后用蒸餾水洗一次； （包括 A1 孔也加） ，輕微

9. 在每孔內加 100μlTMB（使用前混合Ａ液和Ｂ液） 混勻；

10. 37℃放置 15 分鐘； ，輕微混勻；
11. 每孔加 50μl 1N 硫酸終止液（包括 A1 孔）

12. 在 15 分鐘內，用酶標儀在 450nm 處讀取吸光度值（OD 值） （將酶標儀 A1 孔設定為空白孔） 。

二、人過敏毒素/補體片斷4（C4a）ELISA試劑盒結果換算： 以標準樣品的 OD 值為軸，標準樣品的數值為 X 軸，在方格紙或計算機上作 出標準曲線，然后根據標本的 OD 值讀數在標準曲線上讀出相應的 IgG 抗體 濃度。

三、 ELISA試劑盒結果判定： 陰性：抗體濃度≤20u/ml 為正常 陽性：抗體濃度＞20u/ml 為陽性

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