馬免疫球蛋白E（IgE）ELISA試劑盒常見問題處理

出現問題

出現問題的原因

解決辦法

     曲           線

OD值不正常

試劑盒未回溫

試劑盒回溫到25℃

溫度控制不好

控制正確溫度

孵育時間不準確

控制孵育時間

洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、

洗滌次數增加

洗滌4-5次，每孔250ul，然后拍干

陽光直射，對著風直接吹

避風避光

酶標儀的波長錯誤

酶標儀的波長450nm

抗體的稀釋錯誤

正確的稀釋抗體

水質問題

用娃哈哈礦泉水代替

白   板

洗滌液配制錯誤

正確的配制洗滌液

少加液體（抗體、酶標記物、A液、B液）

正確的步驟加液體

錯加液體 

無 梯 度

標準品也污染

換標準品點板

OD值不正常

控制溫度時間在做一次

人為點板

/

線 性 不 好

OD值不正常

控制溫度時間在做一次

人為點板

/ 

回    收    率

空白管陽性高

樣本本身就是陽性樣本

換陰性樣本做回收率

空白管在實驗中被污染

實驗中防止交叉污染

水質原因

用娃哈哈礦泉水代替

偏  高

添加量不準確

精準的添加量

添加濃度不適合

添加合適的濃度

取液吹干量多

準確的取液吹干

取到其它相層液體

取需用相吹干

復溶液未稀釋或加入量少

正確的稀釋復溶液

偏  低

添加量不準確

精準的添加量

添加濃度不適合

添加合適的濃度

取液吹干量少

準確的取液吹干

復溶液稀釋錯誤或加入量多

正確的稀釋復溶液

出現問題

出現問題的原因

解決辦法

假陰、陽性

水質原因

點復溶液驗證

用娃哈哈礦泉水代替

實驗操作原因

吸取到其它相吹干

準確的取液吹干

離心不*

延長離心時間

樣本的污染

更換樣本

乳化未處理*

溫浴（70℃）處理乳化現象

儀器試劑原因

離心管未清洗干凈

正確的洗滌器具

有機溶劑的影響

做試劑空白看影響結果

衍生化試劑原因（長時間衍生化試劑變質）

更換衍生化試劑

與曲線好壞相關

保證曲線的正常

金標檢測（T）線顏色較淺

尿液pH偏堿性 

用0.01M HCl調節尿液pH值到7.0左右。 

尿樣滴加過多 

重新測定，尿樣按照說明書，控制在2滴 

尿液過于混濁 

將尿液離心后，取上清液重新測定 

金標質控（C）線不出現

檢測卡由于高溫、受潮等原因失效 

尿樣需要重新檢測。 

過了有效期失效。 

該批號的金標應丟棄處理，尿液需要重新檢測 

操作過程中檢測卡沒有平放，導致液體樣品直接沖過檢測區 

尿樣需要重新檢測，且檢測卡平放于桌面上再加樣。 

尿液樣品中含有較高的抑制或者干擾抗原抗體反應的物質（比如明礬、小蘇打、氧化劑、肌酐等） 

該尿液的檢測結果無效 

金標卡上在除了T和C線之外的其他地方出線 

金標卡上的劃痕；膠體金在跑板過程中沒有*跑干凈而遺留在卡上的痕跡； 

該檢測卡結果不可信，尿液需要重新檢測。 

實驗重復性不好

操作人員的不*，取樣的不*，樣本數量的多少，加樣時間的長短，洗滌條件不*，加樣量不*

盡量保持的實驗*性

分析軟件的使用

不能設置和保存

正確的設置和保存

如何判斷曲線的好壞和分析結果

正確的判斷曲線的好壞和分析結果