所有產(chǎn)品僅供科研使用，不能用于食用和醫(yī)療等

SP免疫組化試劑盒，免疫組化試劑盒

SP(小鼠/兔IgG)-POD Kit 說(shuō)明書(shū)
產(chǎn)品內(nèi)容：
封閉液（正常山羊血清） 10ml
3% H2O2 10ml
Bio-羊抗小鼠/兔IgG 濃縮液200ul
鏈酶親和素-POD 濃縮液100ul
稀釋液         30ml
20×DAB 顯色液A 1ml
20×DAB 顯色液B 1ml

保存：
如果長(zhǎng)時(shí)間不使用，請(qǐng)將所有試劑存放于-20℃，如經(jīng)常使用，可將封閉液，3% H2O2 和20×DAB
顯色液B 存放于2-8℃以方便使用。

SP免疫組化試劑盒，免疫組化試劑盒

產(chǎn)品說(shuō)明：
本試劑盒適合于一抗為小鼠/兔IgG 的免疫組化實(shí)驗(yàn)DAB 顯色。
SP 試劑盒是專(zhuān)為免疫組化和其他免疫檢測(cè)而設(shè)計(jì)的，用以顯示組織和細(xì)胞中抗原分布。鏈霉親
和素(StreptAvidin)是一種從鏈霉菌中提取的蛋白質(zhì)，同親和素一樣，對(duì)生物素有*的親和力，親
和素是一個(gè)堿性蛋白質(zhì)（PI=10），經(jīng)改造后可以轉(zhuǎn)變成中性蛋白質(zhì)。鏈霉親和素等電點(diǎn)接近中性，
對(duì)組織和細(xì)胞的非特異吸附很低，因此基于鏈霉親和素的免疫組化方法背景很低。
操作步驟:（以石蠟切片為例）
1. 切片常規(guī)脫蠟至水(三次二甲苯，三次乙醇)。
2. 3% H2O2 室溫處理5-10 分鐘以滅活內(nèi)源性酶。蒸餾水洗3 次。
3.可選步聚：
a、熱修復(fù)抗原，將切片浸入0.01M 檸檬酸鈉緩沖液（PH6.0），電爐或微波爐加熱至沸騰后斷電，
間隔5-10 分鐘后，反復(fù)1-2 次。冷卻后PBS（pH7.2-7.6）洗滌1-2 次。
b、酶消化，滴加消化液，37℃10 分鐘，PBS（pH7.2-7.4）洗滌2-3 次。
c、跳過(guò)此步，直接進(jìn)入下一步。
4. 滴加封閉液，室溫20 分鐘。甩去多余液體，免洗。
5. 用稀釋液將一抗按一定比例稀釋?zhuān)ㄏ♂尯蟮囊豢?℃可保存一周），也可另行購(gòu)買(mǎi)抗體稀釋液。
滴加稀釋的一抗37℃ 孵育1 小時(shí)左右或20℃ 2 小時(shí)左右，也可4℃過(guò)夜。PBS（pH7.2-7.4）洗滌3
次，每次2 分鐘。（一抗的稀釋度、孵育時(shí)間和溫度與染色強(qiáng)度、背景有直接關(guān)系。一般來(lái)說(shuō)，陽(yáng)
性染色強(qiáng)度不夠時(shí)，可提高一抗?jié)舛群脱娱L(zhǎng)孵育時(shí)間；背景過(guò)高時(shí)，可降低一抗?jié)舛群涂s短孵育時(shí)
間。）
6． 根據(jù)用量，用稀釋液將Bio-羊抗小鼠/兔IgG 濃縮液按1:100 稀釋成工作液(1ml 稀釋液加入10ul
第2頁(yè)，共2 頁(yè)
Bio-羊抗小鼠/兔IgG 濃縮液混勻，此工作液4℃可保存一周)。滴加Bio-羊抗小鼠/兔IgG 工作液，
20-37℃ 孵育30 分鐘。PBS（pH7.2-7.4）洗滌3 次，每次2 分鐘。
7．根據(jù)使用量，用稀釋液將鏈酶親和素-POD 濃縮液按1:100 稀釋成工作液(1ml 稀釋液加入10ul
鏈酶親和素-POD 濃縮液混勻，此工作液4℃可保存一周)。滴加鏈酶親和素-POD 工作液，20-37℃，
30 分鐘。PBS （pH7.2-7.4）洗滌4 次，每次5 分鐘。
8．DAB 顯色：根據(jù)用量，用PBS（pH7.2-7.4）配制，按1ml PBS 加入50ul 20×DAB 顯色液A，加
入50ul 20×DAB 顯色液B 。充分混勻后滴加到切片上。室溫顯色，鏡下控制反應(yīng)時(shí)間，一般在5-30
分鐘之間。蒸餾水洗滌終止反應(yīng)。
9．蘇木素輕度復(fù)染。脫水，透明，封片。顯微鏡觀察。
對(duì)于細(xì)胞爬片，固定后，PBS 漂洗兩次，再用0.5% Triton X-100 室溫孵育20 分鐘，PBS 漂洗
兩次，3% H2O2 處理15 分鐘；PBS 漂洗兩次，接上述第4 步。
對(duì)于冰凍切片，固定后，PBS 漂洗兩次，接上述第二步。
注意事項(xiàng)：
如果染色背景過(guò)高，在SP 反應(yīng)之后，DAB 顯色之前，用加有0.01—0.02% TWEEN-20 的PBST
（pH7.2-7.4）洗滌切片4 次，PBS 洗2 次，然后DAB 顯色。