如何用ELISA試劑盒,來測試大鼠轉化生長因子β，RAT TGF-β ELISA KIT

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雌激素對去勢大鼠骨折愈合早期TGF-β表達的影響
 

初步探討戊酸雌二醇在骨質疏松性骨折愈合過程中的作用，并通過其對TGF-β的影響進一步探討其作用機制，為絕經后骨質疏松性骨折的治療提供理論依據。 方法：選用6月齡雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠54只，實驗分為SHAM組(假手術組)、OVX組(去勢組)、補佳樂組。除SHAM組外，其余各組均切除雙側卵巢建立骨質疏松動物模型。去勢后8周各組行右股骨骨折建立骨折模型，同時補佳樂組按0.104(mg/kg/d)灌胃。三組均在骨折后第2、4、6、8周處死大鼠后行放射學觀察骨痂變化，骨痂HE染色及成骨細胞、破骨細胞計數，并采用免疫組織化學的方法，觀察各階段骨痂TGF-β的表達變化及半定量分析。 結果：1.放射學：OVX組骨痂密度影低，8周時OVX組骨折線仍然存在，SHAM組和補佳樂組骨折線模糊甚至消失。2、骨痂組織學：OVX組骨小梁表面破骨細胞明顯增多，成骨細胞也較多，呈骨高轉換狀態。8周時骨小梁變細、中斷，軟骨成分仍較多，軟骨性骨痂向骨性骨痂轉化緩慢；SHAM組和補佳樂組隨骨折愈合骨小梁逐漸增加成熟，小梁骨粗大，排列緊密，骨小梁表面成骨細胞體積大，胞漿豐富，破骨細胞減少。3.成骨、破骨細胞指數：2，4周OVX組破骨細胞指數大于補佳樂組和SHAM組。成骨細胞指數在三組間無顯著性差異。4.TGF-β的免疫組化：OVX組2周時陽性細胞主要是纖維組織內的成纖維樣間充質細胞和軟骨細胞，4周時軟骨細胞及周圍基質陽性著色。8周時成骨細胞及周圍類骨質弱陽性著色，肥大的軟骨細胞陽性內表達少或無。補佳樂組2周時軟骨細胞出現強陽性染色，4周時成骨細胞內陽性染色增強，周圍基質也可見陽性染色，軟骨細胞內很少或無陽性表達。8周時軟骨細胞內染色陰性，陽性表達主要位于周圍類骨質。SHAM組與補佳樂組類似。5.TGF-β半定量分析：各組在2周時蛋白陽性表達積分光密度值達到峰值，以后逐漸下降，4周后下降明顯。不同時間點OVX組積分光密度值均明顯低于SHAM組和補佳樂組。 結論⒈本實驗結果顯示補佳樂(戊酸雌二醇)減少破骨細胞數目，增加了成骨細胞活性，抑制骨吸收、促進骨形成，抑制了去勢后骨的高轉換狀態，促進軟骨性骨痂向骨性骨痂轉化，提示戊酸雌二醇對于促進絕經后骨質疏松性骨折早期愈合是有效的。 ⒉TGF-β在補佳樂組和SHAM組的表達均明顯高于OVX組，且主要表達于處于功能活躍期的軟骨細胞和成骨細胞及其周圍基質。提示TGF-β促進軟骨和骨形成，抑制骨吸收，是骨折愈合中重要的細胞因子之一，雌激素可促進TGF-β的分泌，是雌激素促進骨質疏松性骨折愈合可能的機制之一。