我國的科學家發(fā)現(xiàn)了高靈敏的電化學發(fā)光免疫檢測方法

傳統(tǒng)的磁免疫電化學發(fā)光(ECL)檢測方法是將磁微球用作捕獲抗體的載體，利用其較大的反應面積及順磁性來實現(xiàn)對檢測物的快速結合與分離。由于單個抗體分子用作標記探針時表面可修飾的基團有限，在靶標濃度很低時，標記探針數(shù)量很少，很難檢測到，這影響到靈敏度的進一步提高。

本研究將酶聯(lián)免疫吸附分析(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)在酶標板上進行的抗體包被、封閉、抗原結合、二抗結合等程序化的操作步驟與磁微球作為標記探針載體的優(yōu)勢相結合，以劇毒生物毒素相思子毒素(Abrin)為檢測對象，建立了一種高靈敏的電化學發(fā)光免疫檢測方法。實驗過程如圖所示，首先在酶標板上吸附固定相思子毒素多抗，與相思子毒素作用后再與生物素化的單抗結合，形成雙抗體夾心免疫復合物，然后通過生物素-鏈霉親和素特異相互作用連接三聯(lián)吡啶釕標記的親和素包被磁性微球形成磁性微球免疫復合物。將復合物從酶標板上解離后進行電化學發(fā)光檢測。

這樣，結合于酶標板的磁微球的量即可反映Abrin 的濃度，且磁微球表面攜帶大量標記物，可放大檢測信號，提高檢測的靈敏度。利用此方法檢測相思子毒素，濃度在2-200 ng/ L 范圍內(nèi)與電化學發(fā)光強度呈良好的對數(shù)線性關系，檢測限達2 ng/ L。該方法靈敏度較傳統(tǒng)方法提高兩個數(shù)量級，也遠高于目前國內(nèi)外已報道的方法。該法特異性高、重現(xiàn)性好，可用于痕量蛋白的高靈敏檢測，在研究診斷、環(huán)境監(jiān)測、生物防護等領域有較好的應用前景。