zui早研究人員是在1997年發(fā)現(xiàn)了急性髓系白血病（AML）血液樣品中的癌癥干細(xì)胞，但是由于采用表面標(biāo)記物證明實體腫瘤中癌癥干細(xì)胞的存在，常常會出現(xiàn)不一致的結(jié)果，因此這一理論也引發(fā)了激烈的討論。但是近年來科學(xué)家們在所有癌癥類型（膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、結(jié)腸癌、胰腺癌、乳腺癌和肺癌）中發(fā)現(xiàn)了具有自我更新能力，啟動腫瘤發(fā)生的細(xì)胞，因此討論不再圍繞著“癌癥干細(xì)胞是否存在？"了，而是變成了“癌癥干細(xì)胞的類型有多少種？"

要想了解癌癥干細(xì)胞并不容易，其中一大阻礙就是癌癥干細(xì)胞的獲得，許多醫(yī)院會對腫瘤樣品進(jìn)行冷凍切片，而要從解凍組織中獲得可用的細(xì)胞就沒有從新鮮樣品中取樣那么簡單了。另外一個問題在于根據(jù)細(xì)胞表面標(biāo)記分離高純度的細(xì)胞群。近期The Scientist雜志找到了一些專家，請教了他們在這些方面的經(jīng)驗。

通過流式細(xì)胞儀分選干細(xì)胞

斯坦福大學(xué)的干細(xì)胞生物學(xué)與再生醫(yī)學(xué)研究院主任Irving L. Weissma教授是世界*的生物醫(yī)藥科學(xué)家，免疫學(xué)、癌生物學(xué)、干細(xì)胞、腫瘤免疫和細(xì)胞治療等領(lǐng)域的，美國國家科學(xué)院和國家醫(yī)科院兩院院士，文理科學(xué)院院士。他曾在世界上zui早發(fā)現(xiàn)、分離和純化造血干細(xì)胞，并成功用于癌的細(xì)胞移植治療，被譽為“干細(xì)胞科學(xué)的*"。

癌癥干細(xì)胞通常是通過細(xì)胞表面的標(biāo)記物進(jìn)行識別，并利用熒光共軛的抗體進(jìn)行染色（現(xiàn)下設(shè)計出了靶向不同標(biāo)記物的不同顏色熒光試劑），這樣流式細(xì)胞儀就能從懸浮液中檢測到這些熒光細(xì)胞。雖然目前許多染色指南采用的是單克隆抗體，但是一些小心的研究人員還會加上一個封閉步驟，用以阻止抗體識別出假陽性。

Weissma教授建議道，僅僅采用一種標(biāo)記物分離AML干細(xì)胞并不夠，這個由正常造血干細(xì)胞分化成AML癌細(xì)胞的過程我們了解的比較多了，因此應(yīng)該進(jìn)行特異性的標(biāo)記進(jìn)行分離。Weissma教授建議從AML干細(xì)胞群中要分離出CD34+，CD38-，CD90+，和Lin-細(xì)胞群。

對于實體腫瘤，專家則指出研究人員需要先對目標(biāo)癌癥的干細(xì)胞文獻(xiàn)非常了解熟悉，雖然研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)Lgr5 能標(biāo)記結(jié)腸癌腫瘤干細(xì)胞，但細(xì)胞表面的Lgr5 表達(dá)一般較低，其它的標(biāo)記，如EpCAM、CD44和CD166也已由多項實驗證實，可以用于癌癥干細(xì)胞分離（PNAS, 104:10158-63, 2007; J Clin Pathol, 65:140-45, 2012; Oncol Lett, 7:1544-48, 2014）。

來自斯坦福大學(xué)的Michael Clarke是*從實體腫瘤中分離出癌癥干細(xì)胞的科學(xué)家，他警告說雖然細(xì)胞表面的標(biāo)記物可富集，但是這些標(biāo)記物并不能確保分選出來的細(xì)胞就會發(fā)展成一個完整腫瘤——驗證癌癥干細(xì)胞的關(guān)鍵一步。由于實體腫瘤的癌癥干細(xì)胞標(biāo)記差異很大，因此研究人員需要通過移植實驗對單個腫瘤的所有細(xì)胞類型進(jìn)行檢測。

“對于大多數(shù)人來說zui棘手的就是分選，"Dove說，“流式細(xì)胞儀操作并不便宜，也不容易，研究人員如果沒有經(jīng)驗就需要摸索各種閾值，校準(zhǔn)和參數(shù)。而且更重要的是，利用抗體分離癌癥干細(xì)胞會由于發(fā)射光譜重疊而造成紊亂，研究人員應(yīng)該仔細(xì)分析實驗中采用的每種單克隆抗體的用量，比較不同的熒光基團(tuán)抗體組合效果，換句話說，這就是一個費時費力的優(yōu)化過程。

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