新城疫間接ELISA抗體檢測試劑盒的研究介紹

       利用新城疫弱毒Clone30株病毒抗原．通過間接ELISA方法對試劑盒的各項反應(yīng)條件進行系列的摸索試驗后，成功地組裝了檢測試劑盒。 對ELISA各項反應(yīng)條件進行摸索，并確定了zui適工作條件，研究結(jié)果表明，新城疫病毒抗原*包被濃度為1.086ug／ml，zui適包被條件為4℃過夜，被檢血清*稀釋度為1∶100，酶標結(jié)合物*工作濃度1∶800。待檢血清和酶標二抗的反應(yīng)時間均為37℃ 30分鐘，底物的反應(yīng)時間為37℃ 15分鐘。采用已確立的ELISA反應(yīng)條件，檢測14份經(jīng)西班牙海博萊公司的NDV-ELISA試劑盒檢測為陰性的血清，依據(jù)陰陽性臨界值=陰性血清OD平均值+3SD，確定陰陽性臨界值為0.34。用Lasota株全病毒進行阻斷試驗結(jié)果表明，Lasota株病毒能夠阻斷陽性血清與包被的Clone30株病毒的結(jié)合反應(yīng)。用此方法檢測E.coli的O_1、O_2、O_（78），AI H_9，EDS_（76），IBD的單因子雞血清，均為陰性，無交叉反應(yīng)，說明建立的ELISA具有很好的特異性。用已建立的ELISA和西班牙海博萊公司的NDV-ELISA試劑盒同時對64份血清樣本進行檢測，檢測結(jié)果表明，建立的ELISA方法的特異性和敏感性分別為90％和93.2％。同時，用已建立的ELISA方法與HI方法對80份血清樣本進行檢測，結(jié)果表明ELISA的效價對數(shù)與HI效價對數(shù)呈線性回歸關(guān)系，二者的相關(guān)系數(shù)（r）為0.91。試劑盒的保存期試驗結(jié)果表明，試劑盒可以保存到三個月。 本研究建立了一種經(jīng)濟、快速、準確的檢測方法，為我國進行ND的血清學檢測和流行病學調(diào)查提供了良好的技術(shù)手段，為該試劑盒的進一步開發(fā)和商品化奠定了較好的基礎(chǔ)。