丁酰膽堿酯酶(B-CHE)測(cè)定試劑盒的操作過程

丁酰膽堿酯酶(B-CHE)測(cè)定試劑盒的操作過程

（比色法）

一、測(cè)定原理：

丁酰膽堿酯酶水解丁酰膽堿生成膽堿及乙酸，膽堿可以與巰基顯色劑反應(yīng)生成 TNB 黃色化合物，根據(jù)

顏色深淺進(jìn)行比色定量，水解產(chǎn)物膽堿的數(shù)量可以反應(yīng)膽堿酯酶的活力。

二、試劑組成及配制(50T/24 樣)：

試劑一：標(biāo)準(zhǔn)品，粉劑×3 支，4℃保存。

1μmol/ml 標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液的配制：取標(biāo)準(zhǔn)品一支加生理鹽水 10ml 混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。

試劑二：底物粉劑×2 支，用時(shí)每支粉劑加生理鹽水 20ml，現(xiàn)用現(xiàn)配，配好后 4℃保存兩周。

試劑三：顯色劑貯備液，3ml×1 支，4℃保存，用時(shí)以生理鹽水 1︰9 稀釋，配成顯色應(yīng)

用液。需多少配多少，也可以一次配成 30ml，避光冷藏。保存期 3 個(gè)月。

試劑四：抑制劑，液體×1 支。打開后可以裝在空的小塑料瓶?jī)?nèi)（附空瓶一只），室溫保存。

試劑五：透明劑，液體 6ml×1 支。室溫保存。

生理鹽水：60ml×2 瓶，室溫保存。

三、操作過程：

1、樣本前處理：

組織樣本:準(zhǔn)確稱取組織重量,按重量(g)：體積(ml)=1：9 的比例,加入 9 倍體積的生理鹽水，冰水浴條件下

機(jī)械勻漿，2500 轉(zhuǎn)/分，離心 10 分鐘，取上清，即為 10%勻漿上清液;

血清樣本：取抗凝全血 1000～1500 轉(zhuǎn)/分鐘，離心 10 分鐘，取上層血漿。也可測(cè)血清，測(cè)時(shí)將血清(漿)

用生理鹽水 1︰19 稀釋；

全血樣本：取 0.1ml 抗凝全血加生理鹽水至 10ml 按 1︰99 稀釋，取 a ml(一般取 0.1ml)檢測(cè)，每個(gè)樣本

取樣前必須充分混勻。

3、參考取樣量：

①、大鼠血清測(cè)試前用生理鹽水 20 倍稀釋，參考取樣量為 30～50μl。

②、10%腦組織勻漿的參考取樣量為 30～50μl。

③、1︰99 稀釋后的全血稀釋液取 0.1ml。

五、本法優(yōu)點(diǎn)：

1、靈敏度高。微量樣品即可測(cè)出丁酰膽堿酯酶的水平。

2、可以分型。另有配套試劑盒可測(cè)乙酰膽堿酯酶。

3、方法簡(jiǎn)便快速，準(zhǔn)確穩(wěn)定。

4、不需氣相色譜等高級(jí)儀器，只要一般分光光度計(jì)即可。

丁酰膽堿酯酶(B-CHE)測(cè)定試劑盒的操作過程