多酚氧化酶測試盒的粗酶液提取

多酚氧化酶測試盒的粗酶液提取

（多酚氧化酶 Polyphenol Oxidase，PPO ，分光光度測定法）

一、測定原理：

多酚氧化酶能夠催化底物酚產生醌，后者在 420nm 處有特

征性光吸收。

二、測定意義：

PPO 主要存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，是一種

含銅的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化產生醌，從而引起褐化，

與果蔬加工、茶葉品質等密切相關；同時酚類物質對病原微生物

有抑制和殺傷作用，具有一定的抗病能力。

三、試劑盒組成(50T/24 樣)：

四、自備儀器或用品：

可見光分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、

1cm 光徑比色皿、研缽、蒸餾水、冰。

五、粗酶液提取:

1、組織樣本：組織稱重（g）：提取液體積（mL）為 1:5 或

1:10 的比例（例如取 0.2g 組織，加 1mL 提取液或 0.1g

組織加 1mL 提取液），進行冰浴勻漿；8000 轉/分鐘常溫

離心 10min（或 4000 轉/分鐘離心 10min 后取上清再 4000

轉/分鐘離心 10min），取上清待測（取部分上清液于 90℃

以上沸水浴中反應 5min 作為除非處理的粗酶液上清）。

2、血清（漿）或果汁樣本：取血清（漿）或果汁體積（mL）：

提取液體積（mL）為 1:4 或 1：9 的比例（例如取 0.2mL

血清（漿）或果汁加入 0.8mL 提取液，或者取 0.1mL 血

清（漿）或果汁加入 0.9mL 提取液），渦旋混勻抽提 1min；

8000 轉/分鐘常溫離心 10min（或 4000 轉/分鐘離心 10min

后取上清再 4000 轉/分鐘離心 10min），取上清待測（取

出部分上清液于 90℃以上沸水浴中反應 5min 作為除非

處理的粗酶液上清）。

3、細菌或培養細胞：可用稱重法或細胞計數法,詳情參考 注

意事項 。

八、注意事項:

1、細菌或細胞樣本前處理：A:稱重法：提取時可以先取離心

管用萬分之一天平稱重，再收集細菌或細胞到離心管內，

1000 轉/分鐘離心 5min 后棄上清，再次稱重，減去空離心

管重量，再按 2（mg）：1000（μL）或 1（mg）：1000（μL）

的比例加入提取液，超聲破碎（冰浴，功率 20%或 200W，

超聲 3s、間隔 10s，重復 30 次），8000 轉/分鐘 4℃離心

10min，取上清待測，結果按照組織計算方法計算；B：細

胞個數法：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；

按照細菌或細胞數量（10 4個）：提取液體積為 500～1000:1

的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液），超聲

波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20%或 200W，超聲 3s、

間隔 10s，重復 30 次）；8000 轉/分鐘常溫離心 10min，取

上清待測

2、粗酶液提取完，吸出一部分在 90℃以上水浴中煮沸 5min，

取出流水冷卻，作為對照管煮沸的上清用。

3、試劑一在使用前先混勻使其分散后，再吸取進行提取。

4、本實驗組織/細胞樣本用試劑一提取很重要，提取后的粗酶

液除了測定蛋白以外，不能用于測定其他指標，以防止產

生干擾。

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