層析柱裝填方法您知道嗎？

層析柱裝填方法您知道嗎？

1. 填裝之前，檢查層析柱各接頭、部件不能有破損漏氣，并將層析柱清洗干凈，壁上不要有殘留小顆粒，會(huì)影響層析效果；

2. 確保填料、層析柱、所有的緩沖液以及樣品溫度一致，溫度不一致容易導(dǎo)致產(chǎn)生氣泡。

3. 所有過(guò)柱子的液體（包括水、平衡緩沖液、洗脫緩沖液、再生溶液）用0.45um濾膜抽濾，并進(jìn)行超聲脫氣，注意填料不可超聲脫氣；

4. 將填料用純水清洗幾遍，洗掉保存液，并將上層的細(xì)小顆粒棄去；

5. 關(guān)閉層析柱出水口，玻璃棒引流往層析柱內(nèi)倒入約1/4柱體積的水（或緩沖液），務(wù)必使底端無(wú)氣泡；

6. 將填料用玻璃棒攪勻成懸漿，用玻璃棒引流，均勻的一次性倒入柱子內(nèi)，注意務(wù)必不要產(chǎn)生氣泡，待柱子內(nèi)填料穩(wěn)定，打開(kāi)出液管，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降。

7. 如果是手動(dòng)操作，將柱子用純水沖幾個(gè)柱體積，使柱床穩(wěn)定；

如果儀器操作，用逐漸加大流速的方法，將填料壓實(shí)，注意：既不能過(guò)松，也不能過(guò)緊，要注意不能超過(guò)填料的最大耐壓。

8. 上樣前，樣品要進(jìn)行離心或者用0.45um濾膜過(guò)濾；

注意：

1. 始終保持柱內(nèi)液面高于凝膠表面，否則水分蒸發(fā)，凝膠變干，影響填料的純化效果，有轉(zhuǎn)換接頭的柱子，需要保證進(jìn)出液管密封；

2. 防止液體流干，使柱內(nèi)混入大量氣泡，影響純化效果；

3. 切莫超過(guò)填料的最大耐壓，以免對(duì)填料造成不可逆的損壞；

4. 注意不要超過(guò)層析柱的最大耐壓，超過(guò)最大耐壓可能會(huì)漏液，甚至沖掉柱頭；

5. 凝膠一般都比較昂貴，需小心操作，實(shí)驗(yàn)后回收，盡量避免污染、浪費(fèi)和損失。

層析柱裝填方法您知道嗎？