DNA含量檢測(cè)試劑盒，脫氧核糖核酸檢測(cè)試劑盒

DNA含量檢測(cè)試劑盒

DNA Content Quantitation Assay(Cell Cycle)

規(guī)格：20T/50T

保存：-20℃避光保存，一年有效。

試劑組成 ：

產(chǎn)品說明：

細(xì)胞周期是指連續(xù)分裂細(xì)胞從一次有絲分裂結(jié)束到下一次有絲分裂結(jié)束所經(jīng)歷的整個(gè)過程。在這個(gè)過程中，細(xì)胞遺傳物質(zhì)復(fù)制并加倍，且在分裂結(jié)束時(shí)平均分配到兩個(gè)子細(xì)胞中去。細(xì)胞周期又可以分為間期和有絲分裂期，細(xì)胞間期常劃分為休眠期（G 0 ），DNA 合成前期（G 1 ），DNA 合成期（S），DNA 合成后期（G 2 ），整個(gè)周期可表示為 G 1 →S→G 2 →M。DNA 周期檢測(cè)可用來反應(yīng)細(xì)胞周期的各個(gè)期的狀況，即細(xì)胞增殖狀況。利用細(xì)胞內(nèi) DNA 能夠和熒光染料（如碘化丙啶 PI）結(jié)合的特性，細(xì)胞各個(gè)時(shí)期其 DNA 含量不同從而結(jié)合的熒光染料不同，流式細(xì)胞儀檢測(cè)的熒光強(qiáng)度也不一樣。

    細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，由于胞漿和染色質(zhì)濃縮，核裂解，產(chǎn)生凋亡小體，使細(xì)胞的光散射性質(zhì)發(fā)生變化。在細(xì)胞凋亡的早期，細(xì)胞對(duì)前向角光散射的能力顯著降低，對(duì) 90°角光散射的能力增加或沒有變化。在細(xì)胞凋亡的晚期，前向角和 90°角光散射的信號(hào)均降低。因此可以通過流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞光散射的變化來觀察凋亡細(xì)胞。用 PI 對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色，凋亡細(xì)胞由于總 DNA 量降低，于正常 G 0 /G 1 細(xì)胞群前出現(xiàn) DNA 低染細(xì)胞群，即G 1峰前出現(xiàn)亞二倍體峰（sub-G 1）,即細(xì)胞凋亡群。

    本試劑盒可應(yīng)用于培養(yǎng)細(xì)胞（懸浮、貼壁）的 DNA 含量（細(xì)胞周期）檢測(cè)。

使用方法 ：（ 僅供參考 ）

1、 用適當(dāng)?shù)姆椒ㄕT導(dǎo)細(xì)胞凋亡，同時(shí)設(shè)立陰性對(duì)照組，并收集細(xì)胞。

2、 用 PBS 洗滌細(xì)胞一次，1500rpm，5min 離心收集，調(diào)整細(xì)胞濃度為 1×10⁶/ml,取 1ml 單細(xì)胞懸液。

3、 制備的單細(xì)胞懸液離心后，去除上清，在細(xì)胞中加入70%預(yù)冷乙醇 500ul 固定2小時(shí)至過夜，4℃保存，染色前用PBS洗去固定液；如需要，細(xì)胞懸液可用200目細(xì)胞篩網(wǎng)過濾一次。

4、 細(xì)胞沉淀中加 100µl RNase A 溶液，重懸細(xì)胞，37℃水浴 30min。

5、 再加入 400µl PI 染色液混勻，4℃避光孵育 30min。

6、 上機(jī)檢測(cè)，記錄激發(fā)波長(zhǎng) 488nm 處紅色熒光。

注意事項(xiàng) ：

碘化丙啶（PI）染色液保存和使用過程中應(yīng)注意避光。

PI 有毒，操作時(shí)應(yīng)戴手套，并避免污染。

熒光染料都存在淬滅問題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測(cè)。

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