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更新時間：2020-06-18 
瀏覽次數：2566上海信帆為您甄選：western blot檢測中異常實驗結果分析！
上海信帆生物提供western blot檢測服務，很多老師自己做實驗的時候會出現各種異常情況，本公司把可能導致的原因做了一個整理匯總，希望對廣大剛入門的用戶有所幫助，下面就讓我們一起來看看吧！
關于Western blot實驗異常分析
『無信號』
| 原因 | 建議 |
| 一抗與二抗不匹配 | 選擇針對一抗來源種屬制備的二抗； |
| 一抗不識別目的的種屬的蛋白 | 1)檢查抗體的說明書，適用范圍內是否包含目的種屬 |
| 一抗或二抗不足，沒有足夠的抗體結合到目的蛋白 | 1)降低抗體稀釋倍數，增加抗體濃度 |
| 封閉劑與一抗有交叉反應 | 改變封閉劑 |
| 抗原不足 | 1)每個泳道加入20-30ug總蛋白 |
| 在檢測的組織內目的蛋白表達水平低 | 檢測樣本不表達目的蛋白選擇表達量高的細胞作為陽性對照，用于確定檢測樣本是否為陰性，也可更換細胞系 |
| 蛋白轉膜效率低 | 1)利用麗春紅檢測轉膜效率;檢查轉移裝置是否電極弄反 |
| 膜過渡洗滌 | 減少洗滌時間和強度 |
| 疊氮鈉抑制二抗活性 | 二抗稀釋液內不用疊氮鈉 |
『沒有特異條帶』
| 原因 | 建議 |
| 細胞系傳代過多后蛋白表達譜發送變化 | 1)使用未傳代或傳代次數較少的細胞系進行樣品制備 |
| 蛋白本身有很多修飾 | 1)查閱文獻，確定目的蛋白是否存在多種修飾 |
| 蛋白被消化或者降解 | 1)蛋白樣品確保未被污染，確保含有蛋白酶抑制劑 |
| 所檢測蛋白存在多種剪接體，導致分子量大小不同 | 1)查閱文獻或者通過搜索數據庫來確定該蛋白是否存在多種長度不同的編碼mRNA |
| 一抗或二抗濃度高 | 1)減低抗體濃度 |
| 洗滌不夠 | 1)充分洗滌 |
『條帶大小不正確』
| 原因 | 建議 |
| 目的蛋白被降解 | 確保蛋白樣品未被污染，確保含有蛋白酶抑制劑 |
| 存在不同的剪接體 | 查閱文獻或者通過搜索數據庫來確定該蛋白是否存在多種長度不同的編碼mRNA |
| 重組蛋白 | 檢測是否存在額外加入的蛋白 |
| 特殊蛋白如MDM2等 | 仔細閱讀抗體說明書 |
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