IMAC(His) 預(yù)裝柱的使用方法-上海信帆生物

上海信帆生物供應(yīng)IMAC(His) 預(yù)裝柱，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，價格實(shí)惠，深受廣大科研用戶青睞！

建議使用高純度的咪唑，高純度的咪唑在280nm的吸光值較低，甚至不顯示吸光值。緩沖液中咪唑的佳濃度因蛋白的濃度和性質(zhì)而異。

如果重組His標(biāo)簽蛋白是以包涵體的形式表達(dá)，建議在各緩沖液或樣品中添加6M鹽酸胍或8M尿素。使用高濃度的尿素或鹽酸胍，有可能引起蛋白變性，變性蛋白可以實(shí)現(xiàn)復(fù)性。

當(dāng)純化柱所需柱壓明顯升高時，則需要清洗，清洗方法如下：

a. 用至少5~10倍體積的100mM EDTA清洗柱體；

b. 用10倍體積的1.5M NaCl清洗柱體；

c. 用10倍體積的蒸餾水清洗柱體；

d. 用0.2M NaOH處理1~2小時（清除內(nèi)毒素需12小時）；

e. 用10倍體積的蒸餾水清洗柱體；

f. 用2倍體積0.1~0.5%的非離子去污劑（溶于0.1M醋酸）處理1-2小時；

g. 用5倍體積70%的乙醇清洗柱體；

h. 用10倍體積的蒸餾水清洗柱體。

保存溫度：

用20%的乙醇在中性pH值的條件下沖洗介質(zhì)和柱子，在4℃~8℃條件下儲存。

應(yīng)用實(shí)例：

哺乳動物細(xì)胞表達(dá)的HIS標(biāo)簽蛋白，其細(xì)胞分泌上清通過IMAC(His)柱進(jìn)行富集濃縮，高效地純化回收。

圖例）

泳道1：上樣；

泳道M：Protein Marker；

泳道3：流出；泳道4：洗脫1；

泳道5：洗脫2；泳道6：洗脫3。

產(chǎn)品描述:

螯合的Sepharose，當(dāng)帶有Ni2+離子時，如果形成氨基酸殘基的復(fù)合物，特別是組氨酸殘基被暴露在蛋白質(zhì)表面時，可以選擇性的結(jié)合蛋白質(zhì)。(His)6融合蛋白可以很容易的結(jié)合到親和柱上，然后用含有咪唑的緩沖液進(jìn)行洗脫。 

產(chǎn)品用途：

His融合蛋白的純化。

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